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    慢病毒包装

    Column：Biochemical testing platform Time：2024-04-16
    慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

     慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为RNAi、cDNA克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达

    慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。

    实验流程

    1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体；

    2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒；

    3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；

    4. 浓缩、纯化病毒液；

    5. 用高质量的病毒液感染细胞；

    6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度（高精确滴定方法）和Western 分析实验结果；

    7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞；检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进行稳定转染细胞株的筛�。ǔＷ纯鱿�，筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。
      w88win优德提供慢病毒载体构建，RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装，以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

    拓普生物慢病毒包装特点：

    1.采用第三代4质粒慢病毒包装系统，生物安全性更高； 
    2.采用VSV-G包膜，宿主范围更广； 
    3. 产生的慢病毒滴度高，可达108~1010TU/mL； 
    4.各种慢病毒穿梭载体可供选择：过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等； 
    5.可带有荧光报告基因（GFP、RFP、mCherry、Luciferase等）和药筛标记基因（Puro、Neo、Hygromycin等），有多种启动子（CMV、PGK、CAG、Ubc等）可供选择； 
    6.    4~5周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。


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