慢性肾衰竭模型构建
一、研究背景
慢性肾衰竭(Chronicrenal failure，CRF)是指发生在各种慢性肾脏疾病基础上，由于肾单位和肾功能受到严重损害，导致肾小球滤过率(Glomerular filtration rate，GFR)下降，出现体内代谢产物的潴留、水电解质和酸碱平衡失调、内分泌紊乱的一种综合征，是肾脏及肾脏相关性疾病的最终结局[1]。
慢性肾衰竭主要病理特点为不断进展的肾小球和肾间质的纤维化，是几乎所有类型的慢性肾脏病不断发展直至终末期肾病(ESRD)的共同病理途径[2-3]。5/6肾脏切除模型是一种较为成熟和经典的研究慢性肾衰肾脏纤维化发生发展机制的实验模型，肾脏切除之后，残存的肾脏出现高压力、高滤过、高灌注状态，激活氧化应激、炎症等病理过程，可促进肾脏纤维化的发生，进而导致慢性肾衰竭。
二、实验方案
1、实验动物：SD大鼠，雌雄各半，6~8周龄；
2、CRF模型制备[4]
大鼠适应性饲养1周，腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉，将大鼠固定在手术板上。首先在大鼠的脊柱两侧肾脏部位进行皮毛剔除，碘伏对此部位常规消毒，穿戴无菌的手套，铺盖无菌的洞巾。然后沿肋脊角行左背部斜切，手术切口约为2.0~2.5cm，剪开大鼠的皮肤及肌肉，用左手探查左肾所在部位，并用中指将其从腹侧往切口的方向托出，使左侧肾脏充分暴露，用镊子对肾包膜进行剥离，采用7号线对左肾上、下极结扎，结扎范围大约为皮质2/3的肾组织，将结扎部分切除完毕后，立即用止血海绵压迫左肾上下极切口以进行止血，当观察到左肾手术切口无明显的出血后复位左肾脏，对肌肉、皮肤进行逐层缝合后，用碘伏进行手术缝合口消毒。术后连续3天用青霉素(8万单位/100g·d)肌肉注射杀菌抗感染。1周后进行第2次手术，在脊柱右侧斜切口，剥离肌层，充分暴露右肾脏，用缝合线结扎右肾门部位后，直接切除右侧肾脏，逐层缝合后进行手术切口消毒。同样肌注青霉素(8万单位/100g·d)3天。假手术组制备的手术过程同5/6肾切除手术，但仅做双肾被膜剥离术。
3、观察指标
3.1生化法检测血清肌酐Scr、尿素氮BUN、尿肌酐Ucr的含量；
3.2 收集大鼠的24h尿液，ELISA法检测24h尿蛋白的含量；
3.3 计算肌酐清除率Ccr[5]
Ccr(ml/min/100g)=[尿肌酐(μmol/L)×24小时尿量(ml)]／[血肌酐(μmol/L)×体重（g）×14.4]
3.4肾脏组织病理学检测及评分：HE染色、PAS染色、MASSON染色
根据参考文献[6]对肾间质纤维化程度进行半定量评分：
随机选取互不重叠10个视野，400倍显微镜下观察，按下列标准对肾脏病理改变进行评分：
肾间质细胞浸润评分：
病理改变 | 评分 |
无间质细胞浸润 | 0分 |
局灶细胞浸润 | 1分 |
多灶细胞浸润 | 2分 |
弥漫细胞浸润 | 3分 |
肾小管萎缩和间质纤维化的慢性病变评分：按病变面积占该视野的百分比计算
病理改变 | 评分 |
无间质纤维化 | 0分 |
间质纤维化＜25% | 1分 |
25%≤间质纤维化＜50% | 2分 |
间质纤维化≥50% | 3分 |
肾小管萎缩病变评分
病理改变 | 评分 |
无肾小管萎缩 | 0分 |
肾小管萎缩＜25% | 1分 |
25%≤肾小管萎缩＜50% | 2分 |
肾小管萎缩≥50% | 3分 |
三、参考文献
[1] 葛均波，徐永�。诳蒲�[M]．8版．北京：人民卫生出版社，2013：524．
[2] Boor P，Ostendorf T，Floege J．Renal fibrosis：novel insights into mechanisms and therapeutic targets[J]．Nat Rev Nephrol, 2010, 6(11)：643-656．
[3] Duffield JS．Cellular and molecular mechanisms in kidney fibrosis[J]．Journal of Clinical Investigation, 2014, 124(6)：2299-2306．
[4] Xiao Q, Guan Y, Li C, et al. Decreased expression of transforming growth factor-β1 and α-smooth muscle actin contributes to the protection of lotensin against chronic renal failure in rats[J]. Ren Fail. 2018 ,40(1):583-589.
[5] Li HY, Hou FF，Zhang X，et a1．Advanced oxidation protein products accelerate renal fibrosis in a remnant kidney model[J]. J Am Soc Nephrol, 2007，18(2)：528-538．
[6]陈琇萌，俞小敏，肖洁. 尿毒清颗粒抑制大鼠肾脏间质纤维化作用靶点研究[J]. 湖南中医药大学学报，2017，37（1）：33-37.
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