细胞瞬时/稳定转染
栏目：细胞瞬时/稳定转染
发布时间：2024-04-16
细胞转染的基本原理是将外源的DNA克隆到载体上后导入细胞，借助宿主细胞表达载体上的目的片段，从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种，如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。
细胞转染的基本原理是将外源的DNA克隆到载体上后导入细胞，借助宿主细胞表达载体上的目的片段，从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种，如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，另一类是稳定转染。瞬时转染的外源DNA不整合到宿主的染色体中，通常表达只持续几天，一般在转染24-72小时后检测。稳定转染的外源DNA将整合到宿主染色体中，可持续性表达，一般用于稳定细胞株的构建。
服务内容
l 脂质体转染（瞬转）
1.载体构建（可�。�，RNAi合成（视转染情况而定）；
2.将细胞按照1~3x105接种到6孔板中，加入2~4mL的完全培养基，混匀放置在二氧化碳培养中，37℃过夜；
3.无菌状态下配置如下液体：
a.用100μL的Opti-MEM培养基稀释2μg的待转染质粒；
b.用100μL的Opti-MEM培养基稀释25μL的Lipofectamine转染试剂；
4.将a, b液混合并混匀，室温放置15min；
5.细胞培养至80%单层左右，用Opti-MEM培养基洗涤细胞两次，每孔加入1mL Opti-MEM培养基，并将混合后的ab溶液逐滴加入到每孔中，按十字方向轻摇混匀，二氧化碳培养箱中培养；
6. 4-6小时后将转染液吸出，换为新的完全培养基继续培养，培养3-4天后检测蛋白表达量。
l 腺病毒转染（瞬转）
1.腺病毒质粒构建；
2.以脂质体转染的方法包装腺病毒，测其滴度；
3.不同MOI下测试得最佳转染效率值；
4.使用最佳MOI对细胞进行转染。
l 慢病毒转染（稳转）
1.慢病毒质粒构建；
2.以脂质体转染的方法包装慢病毒，测其滴度；
3.不同MOI下测试得最佳转染效率值；
4.使用最佳MOI对细胞进行转染；
5.进行稳转株筛选。
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